刚地弓形虫磷酸甘油酸变位酶2基因片段克隆、表达及抗原性分析

摘要

目的：克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGPGAM2)基因片段，并分析其抗原性。方法：提取弓形虫RH株速殖子总RNA，逆转录合成cDNA。PcR扩增TgPGPGAM2基因。扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体，重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5a，阳性菌落经PcR和双酶切鉴定，并测序。将重组质粒pET30a(+)-TgPGPGAM2转化至E.coliBL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sDs．PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。以兔抗弓形虫血清为一抗，蛋白质印迹(wlestem b10ning)分析重组蛋白的抗原性。 结果：PCR扩增产物约为750 bp。菌落PcR、双酶切和测序结果显示，重组质粒pET30a(+)-堙PGAM2构建成功。sDs．PAGE结果显示，经lPlIG诱导获得相对分子质量(Mr)约30kDa的可溶性重组蛋白。westem blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别。 结论：刚地弓形虫RH株聊GAM2基因片段可在原核表达系统中高效可溶性表达，该重组蛋白具有抗原性。