Pci-LaeA在橘青霉中全局性调控功能的研究

摘要

目的:初步探究Pci-LaeA在橘青霉中对其生长、发育和次级代谢产物合成的调控作用，并通过基因工程改造提高橘青霉中重要次级代谢产物美伐他汀(mevastatin/ML-236E/compactin)的生物合成量。方法:首先建立根癌农杆菌介导的橘青霉遗传转化体系;在此基础上通过同源双交换的方法构建Pci-1aeA的缺失、回补以及高表达菌株;研究原始橘青霉和这三种经遗传改造的重组橘青霉在生长形态、发育特征和次级代谢产物合成种类和含量的变化情况:通过RT-qPCR定量分析Pci-IaeA与ML-236B次级代谢基因簇中的途径特异性调控因子mlcR表达情况。结果:目前己经建立起了以根癌农杆菌LBA4404介导的橘青霉的遗传转化体系，当LBA4404<即GiHTG)(ODD=0.4)与生长4天的橘青霉(ATCC: 38065)分生抱子按照1:1的比例混合后在诱导培养基上共培养48h，再经筛选可以获得较多的转化子。结论:成功构建的LBA4404介导的橘青霉遗传转化体系说明橘青霉是可以通过根癌农杆菌介导的方式进行遗传修饰。推测Pci-LaeA也会影橘青霉的生长、发育和次级代谢产物的合成，对次级代谢产物ML-236B合成的影响很可能是通过影响其途径特异性调控因子mlcR的转录表达实现的。