山羊支原体山羊肺炎亚种qPCR检测方法的建立

摘要

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是引起山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原.本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(LN515398.1)MCCPF38_arcD(_00114)基因序列设计1对特异性引物,建立了针对Mccp的SYBRGreenⅠqPCR方法.结果显示,该方法能特异性检测Mccp,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)、绵羊肺炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo),、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)、巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Prn)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、副猪嗜血杆菌Haemophilusparasuis,HPS)及羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)等羊常见病原均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;该方法的最低检测限为279拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1％,说明该方法灵敏度高、重复性好.本研究建立的检测Mccp F38arcD基因的qPCR方法为CCPP的临床早期诊断及定量分析Mccp感染水平提供了更准确的方法.