基于TMT标记和HPLC-MS/MIS技术发现和鉴定绝经后骨质疏松症血清生物标志物的研究

摘要

目的:应用串联质谱(TMT)结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术进行蛋白质组学分析,筛选绝经后骨质疏松症患者的血清蛋白分子标志物. 方法:选取10例绝经后骨质疏松患者及10例绝经后骨量正常患者,分别获取其血清,去除高丰度比蛋白,提取分化蛋白并用TMT试剂标记.接着进行质谱检测,差异表达蛋白质的数据分析和生物信息分析. 结果:从经TMT标记结合LC-ESI-MS/MS技术鉴定的蛋白表达谱中筛选出87个显着表达的差异蛋白,其中上调蛋白50个,下调蛋白37个.对差异表达蛋白进行GO基因注释分析,发现这些差异表达蛋白主要参与15种生物学过程,主要来自7种细胞组成,主要具有6种分子功能.初步筛选出与骨质疏松骨重建相关的RAB7A、TSP1、GAS6、SPP24等4个候选蛋白.通过STRING10.0蛋白相互作用网络分析工具发现RAB7A、TSP1、GAS6在相互作用网络图中处于功能网络交叉点;SPP24处于网络边缘,但是其与骨重建重要蛋白BMP2直接相关. 结论:本研究证明基于TMT标记联合LC-ESI-MS/MS技术可作为鉴定筛选绝经后骨质疏松症的血清蛋白分子标志物的有效方法;RAB7A、TSP1、GAS6、SPP24等4个蛋白可能是诊断和治疗绝经后骨质疏松症的潜在有效血清分子标志物.