桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定

摘要

病毒诱导的基因沉默(VIGS)是近年来发现的一种转录后基因沉默(PTGS)现象,现已被开发为快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术.建立桑树VIGS转化体系,为桑树功能基因研究提供有效简便的试验方法.文以丰驰桑(Morus alba)为材料,运用生物信息学方法和RT-PCR技术,选取同源性较高的片段设计八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因的特异性引物,克隆出片段长度为346bp的序列作为干扰片段,经XbaⅠ和BamHⅠ双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV2)连接构建VIGS重组载体pTRV2-MPDS,转化农杆菌(LBA4404)后,侵染桑树幼苗.利用构建的桑树PDS基因的重组载体pTRV2-MPDS侵染桑树幼苗,桑树内源PDS基因被沉默,叶片出现明显的白化袁型,通过qRT-PCR定量检测显示,被侵染叶片的PDS基因显著降解,成功构建桑树VIGS转化体系.桑树VIGS转化体系的建立为桑树功能基因的研究及功能调控分子机制奠定了试验基础.