E.tenella河北株SO7基因生物信息学分析及毕赤酵母系统中表达

摘要

鸡球虫病是严重危害养鸡业的主要原虫病之一，该病经常呈爆发性流行，可以感染不同日龄的鸡，其中雏鸡最易感，在感染球虫第5-6天后，盲肠壁增厚，严重出血、肿大，发病率和死亡率最高，给养鸡业带来巨大的经济损失。为了分析柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株SO7基因生物信息学,并用毕赤酵母表达其SO7蛋白,为研究SO7蛋白功能及E.tenella疫苗的研制奠定基础.利用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株SO7基因连接到pMD18-T载体中,进行测序及生物信息学分析;将SO7基因克隆到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-SO7线性化后,转化巴斯德毕赤酵母GS115细胞中,甲醇诱导表达,采用SDS-PAGE和Western-blotting方法验证蛋白的表达.结果显示:E.tenella河北株SO7基因编码215个氨基酸,具有一个开放阅读框,大小为645bp,与GenBank中登录的参考株氨基酸序列的同源性在98.1％～99.1％之间,与HN株同属一个分支,遗传关系较近;蛋白结构预测编码蛋白无跨膜区,342个氨基酸编码蛋白的都在细胞膜外.SDS-PAGE和Western-blotting结果表明,重组表达载体pPIC9-SO7,在毕赤酵母菌中表达出大约87kDa的目的蛋白.综上所述,E.tenella河北株SO7基因可以作为构建核酸疫苗候选基因之一.