不同胚期分离的鸡原始生殖细胞(PGCs)遗传与培养特性比较

摘要

根据家禽PGCs的迁移路径,分别从孵化24h的鸡胚生殖新月(gcPGC)、2.5d的胚血(cPGC)和5.5d的生殖腺(gPGC)中分离PGCs,置于完全培养液中培养,表达干细胞标志物SSEA-1和生殖细胞特异标志物DAZL,表明成功分离得到PGCs.CCK-8法细胞增殖检测显示,BRL-3A饲养层细胞能明显促进PGCs的体外增殖,与无饲养层条件培养的PGCs间有显著差异,但不同来源PGCs间无增殖速度的差异.检测这3种不同来源PGCs的克隆形成能力,结果显示cPGCs的克隆形成率最高,克隆体积最大.RealTime-PCR结果显示多能性相关基因cNanog和cPouV在gcPGCs中的表达量最高,而生殖相关基因Dazl和Cvh在cPGCs中的表达量最高.结果表明,体外培养的PGC保持其体内遗传状况,即gcPGC的多能性最好,cPGC开始进入生殖系分化,而gPGC可能已部分进入减数分裂.而从培养特性上来看,gcPGC由于数量过少难以扩大培养,而gPGC混合的分化细胞过多,cPGC是体外培养和增殖分化研究的最佳细胞来源.