猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

摘要

根据GenBank登录的猪支原体株黏附素P97基因序列,应用Primer Express2.0软件设计1对特异性引物和1条探针,优化了猪喘气病实时荧光定量PCR检测方法,25μL反应体系,引物MhpF/MhpR(20μmol/L)各0.5μL,探针MhpP(20μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性.特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测猪喘气病,与他主要猪病病原检测无交叉反应;针对猪喘气病阳性质粒标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数在0.74％-1.52％之间.用建立的实时荧光定量PCR检测方法,对40份临床样品检测,结果表明肺脏拭纸与肺脏悬液阳性率完全一致,而鼻腔拭纸检测率较低.