基于NOS信号的EOFAZ对ox-LDL诱导HAECs损伤的保护作用研究

摘要

目的：研究艳山姜挥发油(EOFAZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用. 方法：体外传代培养HAECs,EOFAZ保护作用研究分为7组：对照组(control,无血清ECM),模型组(ox-LDL,200mg/L ox-LDL),EOFAZ高剂量组(200mg/L ox-LDL+100μg/L EOFAZ),EOFAZ低剂量组(200mg/L ox-LDL+10μg/L EOFAZ),阿司匹林组(Asp.,200mg/L ox-LDL+2.5×10-4mol/L Aspirin),卡维地洛组(Car.,200mg/L ox-LDL+1×10-6mol/L Carvedilol),阿托伐他汀钙组(Atov.,200mg/L ox-LDL+1×10-6mol/L Atorvastatin Calcium);NOS信号研究分为5组：对照组(无血清ECM),模型组(200mg/L ox-LDL),EOFAZ组(200mg/L ox-LDL+100μg/L EOFAZ),NOS抑制剂组(200mg/L ox-LDL+100μmol/L L-NAME或300μmol/L-NMMA),EOFAZ加NOS抑制剂组(200mg/L ox-LDL+100μg/L EOFAZ+100μmol/L-NAME或300μmol/L L-NMMA).MTT法分析细胞存活率,酶标仪法、Griess试剂法分别检测培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和一氧化氮(NO)含量.化学法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性.实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)检测iNOS及eNOS mRNA表达水平. 结果：EOFAZ明显提高ox-LDL诱导损伤的HAECs的细胞存活率,抑制LDH外漏及iNOS活力(P＜0.05,P＜0.01),促进NO及eNOS的产生(P＜0.05,P＜0.01).qRT-PCR分析表明,EOFAZ以及相关抑制剂显著下调iNOS mRNA表达水平(P＜0.05,P＜0.01),上调eNOS mRNA表达水平(P＜0.05). 结论：EOFAZ对ox-LDL诱导损伤的HAECs具有保护作用,其作用机制与调控eNOS和iNOS的表达水平有关.