活血平突散对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的影响

摘要

目的：1)观察活血平突散含药血清对IFN-γ刺激后人球后成纤维细胞的增殖,HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成,MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2活性,CD54、HLA-DR、CD40表达的影响;2)初步探讨活血平突散治疗TAO的机制. 方法：取眼外伤或其他眼部手术患者的眼球后结缔组织进行体外原代、传代培养,对培养的2～8代球后成纤维细胞进行鉴定后,先行预实验以选取活血平突散含药血清的最适宜剂量,确定后开始进行正式分组实验.空白对照组采用含20％的胎牛血清培养液培养;空白大鼠血清对照组采用含20％大鼠血清的培养液培养;模型组采用含20％大鼠血清并加入200u/ml IFN-γ的培养液进行培养;活血平突散组采用含20％活血平突散大鼠血清和加入含有200u/ml IFN-γ的培养液进行培养.最后依次采用MTT法、ELISA法、免疫组化法、流式细胞仪检测各组中RFs的增殖,HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成,MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2的活性,CD40、CD54、HLA-DR的表达情况,并对实验数据进行统计分析. 结果：1)MTT法检测四组OD值以反映各组RFs的增殖情况,结果显示：空白大鼠血清对照组、空白对照组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组较空白大鼠血清对照组、空白对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);活血平突散组较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).2)用ELISA法检测四组HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的合成：模型组的HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较空白大鼠血清对照组、空白对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);活血平突散组的HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原合成较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).3)用免疫细胞化学法检测四组的MMP-1、MMP-2活性：空白大鼠血清对照组、空白对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组的MMP-1、MMP-2活性较空白大鼠血清对照组、空白对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05);活血平突散组的MMP-1、MMP-2活性较模型组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).4)用免疫细胞化学法检测四组的TIMP-1、TIMP-2活性：空白大鼠血清对照组、空白对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组的TIMP-1、TIMP-2活性较空白大鼠血清对照组、空白对照组增高,差异有统计学意义(P＜0.05);活血平突散组的TIMP-1、TIMP-2活性较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).5)用流式细胞仪检测四组的CD40、CD54、HLA-DR表达：空白大鼠血清对照组、空白对照组两组比较无统计学差异(P＞0.05);模型组的CD40、CD54、HLA-DR表达较空白大鼠血清对照组、空白对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);活血平突散组的CD40、CD54、HLA-DR表达较模型组明显降低,差异有统计学意义.(P＜0.05). 结论：活血平突散能够通过抑制球后成纤维细胞的增殖,抑制HA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的异常合成,逆转MMPs/TIMPs的失衡,抑制CD40、CD54、HLA-DR的高表达来起到治疗TAO的作用.