实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠炎性因子表达的动态观察

摘要

目的:研究光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)诱导的EAU小鼠不同天数脾脏和血清中炎性因子的动态变化,探讨各种炎性因子在EAU病理过程中的作用.方法:用IRBP及完全弗氏佐剂的乳化液免疫C57BL/6(B6)小鼠44只,其中20只用来观察EAU小鼠的眼球病理变化,余下的24只分8组,在免疫前、免疫后第2天、5天、10天、15天、20天、25天和第30天分别取小鼠脾脏,提取RNA,逆转录扩增并行凝胶电泳,检测IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-10等因子mRNA含量;收集相同天数小鼠的血清,采用ELISA试剂盒检测血清中上述因子的变化.结果:IRBP及完全弗氏佐剂的乳化液免疫C57BL/6(B6)小鼠，所诱导EAU模型仅表现为轻度葡萄膜炎症，炎症在免疫后第13-15天最重。各种因子具有不同表达趋势:造模后第5天，血清中IL-17的浓度达到峰值51.85±2.42pg/ml，然后随着时间的延长开始降低。到第15天时降到最低，之后逐渐升高，第25天的时候达到下一个小的高峰，随后又开始降低。到第30天时，血清中IL-17的浓度为6.01±0.21pg/ml，与免疫前相比差异仍有统计学意义(p=0.000)。IFN-γ的浓度在造模后第5天达到50.54±0.48pg/ml，之后其浓度继续升高，到第10天达到峰值，然后随时间延长逐渐降低。到第30天时，血清中IFN-γ的浓度为5.15±0.18pg/ml，与免疫前相比差异仍有统计学意义(p=0.000)。EAU小鼠血清中TNF-α含量升高迅速，免疫后第二天含量较免疫前升高(p=0.000)。第5天达到峰值，浓度为134.25±0.59pg/ml，然后到第巧天降到最低。第20天又达到一个新的峰值，浓度为60.54±0.62pg/m1。之后又逐渐下降，第30天和免疫前相比差异无统计学意义(p=0.66)。 IL-10在免疫后第5天可以被检测到，并且随着免疫天数的增加逐渐升高。到第15天时达到高峰，随后开始降低，第30天与第0天相比有统计学意义。脾脏中IL-10, IL-17, TNF-α, IFN-γ四种因子mRNA表达变化趋势和血清中的变化一致。结论:在B6小鼠的EAU中，Th1、 Th2、Th17相关炎症因子IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-17具有特征性变化规律:IFN-γ的表达呈单一峰值曲线，说明IFN-γ可能与EAU的急性期病理过程相关;IL-17及TNF-α的表达呈现渐弱的双峰值曲线，说明IL-17, TNF-α可能与葡萄膜炎的慢性化、复发性有关;IL-10的表达在病变最重时达峰值，之后维持较高水平表达，EAU病情的减轻与IL-10表达的变化一致，推测IL-10具有减轻EAU的保护作用。