Notch-rUNX!信号通路在FEGF促大鼠间质干细胞增殖中的作用

摘要

目的：本实验使用Notch通路阻断剂DAPT以阻断Notch-Runx1信号传导通路,观察其对血管内皮生长因子(VEGF)作用下大鼠间充质干细胞(MSC)增殖及Notch-Runx1通路相关基因mRNA的影响,研究Notch-Runx1信号传导通路在VEGF促进大鼠间充质干细胞增殖中的作用.方法：1.体外培养大鼠间充质干细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究.2.实验分为4组,分别为对照组,VEGF组,DAPT组,两药组(VEGF+DAPT).3.显微镜下(100×)观察各实验组细胞形态的变化.4.应用CCK-8法检测各实验组大鼠间充质干细胞的增殖情况.5.应用RT-PCR法分别检测各实验组Notch-Runx1通路相关基因(Notch1、Notch2、FIk-1、HES-1、RUNX-1)mRNA水平的变化.结果:1.各实验组在培养72h后，显微镜下观察发现，与对照组相比，VEGF组细胞数目明显增多，形态活性较好，而DAP丁组和两药组细胞形态变圆脱落，数目明显减少。2.各时间点(24h,48h,72h)VEGF组存活率均最高，而DAPT组及两药组存活率均较低，差异具有统计学意义(P<0.01)，提示VEGF对MSC有明显的促进作用，而这种促进作用可被DAPT所抑制。3.与对照组相比，VEGF组的 Notch1,Notch2和Flk-1的mRNA表达水平均有上调，而DAPT组及两药组Notch1和Notch2的mRNA表达水平均下调，差异均具有统计学意义(P<0.05)，RAPT组及两药组的Flk-1基因mRNA表达水平稍有下调，但差异无统计学意义(P>0.05)。4.HES-1 mRNA在各组的表达水平变化不明显，差异均无统计学意义(P>0.05)。5.RUNX-1 mRNA表达水平在VEGF组有所降低，而在两药组有所提高，差异均有统计学意义(P<0.05)，DAPT组的RUNX-1 mRNA表达水平稍有增高，但差异无统计学意义(P>0.05)结论：1.VEGF对大鼠间充质干细胞的增殖具有明显促进作用;而DAPT可以抑制这种增殖作用。2.VEGF可上调Notch-Runx1信号通路中Notch1,Notch2,Flk-1 mRNA水平。DAPT可下调Notch-Runx1信号通路中Notch1,Notch2 mRNA水平;VEGF可下调Runx-1 mRNA表达水平，而DAPT对Runx-1 mRNA表达水平影响不明显。3.Notch-Runx1信号通路在VEGF促大鼠间充质干细胞增殖中起到关键性作用。