SWI/SNF染色质重塑复合物在胚胎心脏室间隔发育中的作用伴侣及功能研究

摘要

目的:研究在小鼠胚胎心脏室间隔发育关键时间点E11.5及E13.5不同SWI/SNF复合物的组成及其作用伴侣.方法:小鼠胚胎E11.5及E13.5小鼠胚胎心脏的DNA芯片检测(重复3遍)及分析,筛选出有差异表达的SWI/SNF染色质重塑复合物亚基基因;分别通过real-time PCR及Western blot验证表达的差异性.采用免疫组织化学分析表达差异具有统计学意义的SWI/SNF染色质重塑复合物亚基在小鼠胚胎心脏室间隔发育过程中的定位表达;应用染色质免疫共沉淀实验(CHIP)研究SWI/SNF的ATP核心亚基BRG1(或BRM)可以募集的SWI/SNF亚基,以及各个SWI/SNF亚基对BRG1(或BRM)的募集.结果:DNA芯片结果显示E11.5及E13.5小鼠胚胎心脏有显著性差异表达(Fold change>1.5,P<0.05)的SWI/SNF复合物亚基共7个(BRG1，BRM,BAF155,Baf47,Baf60a,Baf60b,Baf60c);经过real-time PCR及Western blot验证上述E11.5及E13.5小鼠胚胎心脏表达差异有统计学意义的SWI/SNF复合物亚基基因共5个(BRG1,BRM,BAF155,Baf60a,Baf60c);免疫组织化学分析E11.5及E13.5小鼠胚胎心脏发育过程中，BRG1,BRM,BAF155,Baf60a,Baf60c均可于定位表达与室间隔相应结构区域;染色质免疫共沉淀实验(CHIP)发现BRG，可以共沉淀BAF 155BaffiOa，同时BAF155,Baf60a也可以共沉淀BRG1，另外，BRM可以共沉淀BAF155.Baf60a,Baf60c，而BAF155,Baf60a,Baf60c也可以共沉淀BRM.结论:SWI/SNF复合物亚基BRG1,BRM,BAF155,Baf60a,Baf60c均参与了小鼠胚胎心脏室间隔发育过程;小鼠胚胎心脏室间隔发育过程中AT尸核心亚基BRG1(或日RM)的分子伴侣有交集也存在差异，说明小鼠胚胎心脏室间隔发育过程中存在不同SWI/SNF组分功能差异的调控机制。