二氢叶酸还原酶基因表达上调对卵巢上皮癌细胞系生物学特性影响的体外实验研究

摘要

本文旨在构建携带人二氢叶酸还原酶(DHFR)基因的慢病毒表达载体pWPI.采用PCR方法扩增二氢叶酸还原酶cDNA全长,与EZ-T克隆载体连接,HindⅢ及BamHI-HF限制性内切酶双酶切回收的PCR片段并补平其缺口.慢病毒系统载体使用pWPI系统,采用PmeI酶切载体后回收片段,将其磷酸化,T4酶连接载体与目的基因.表达载体鉴定均采用核苷酸序列测定,重组质粒采用脂质体转染293T包装细胞后获得包装的病毒颗粒.结果成功采用慢病毒载体系统构建了二氢叶酸还原酶重组慢病毒转基因，耐药性功能实验表明DHFR表达量增高时卵巢癌细胞系耐药性增加，可以认为DHFR与卵巢癌顺铂的耐药性相关，为探讨DHFR在肿瘤多药耐药过程中的分子机理奠定基础。