目的：本研究旨在通过蛋白组学技术和基因组学技术研究甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981蛋白质表达谱和基因表达谱的影响，从中筛选出感兴趣的差异表达蛋白和基因，分析其生物学功能，从而探讨甲基硒酸对L9981肺癌细胞株的生长抑制作用及凋亡诱导作用的可能多靶点分子机制。方法：(1)应用体外细胞培养技术，通过培养细胞存活率/浓度分析系统检测MSA对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981体外增殖能力的影响;(2)应用PI/ANNEXIN-V双荧光染色和流式细胞技术检测MSA对L9981细胞的早期凋亡诱导作用;(3)应用双向荧光差异凝胶电泳(2D DIGE)技术检测MSA对L9981细胞蛋白组表达谱的变化，分析蛋白表达差异点;(4)应用LC-MS/MS质谱技术鉴定感兴趣蛋白点特异性酶解肤段序列信息，并进行生物学功能分类;(5)应用Western Blot和Real time RT-PCR技术分别验证质谱结果;(6)应用Affymetrix人全基因组表达谱芯片技术检测MSA对肺癌细胞株L9981基因组表达谱的变化，对差异表达的探针进行生物学注释和分类;(7)应用Real time RT-PCR技术验证MSA处理后的关键基因的mRNA表达变化。结果: MSA可显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外增殖能力，并目具有剂量依赖性，72h半数生长抑制浓度为2.33μM，成功获得MSA处理前后的L9981的全细胞蛋白的双向荧光差异凝胶电泳图谱，成功获得MSA处理前后L9981肺癌细胞的人类基因组表达谱芯片扫描图，与对照组比较，Real-time RT-PCR验证显示有39个关键基因的mRNA表达水平与基因芯片结果趋势一致。结论:(1)MSA能显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外增殖能力，并诱导细胞凋亡;(2)MSA处理L9981细胞后，引起蛋白表达谱和基因表达谱发生了显著变化，差异表达蛋白和差异表达基因主要涉及内质网应激，内质网钙调节，氧化应激反应，翻译调节，线粒体能量代谢，细胞骨架和运动，细胞生长信号传导和凋亡等;(3)MSA通过多靶点调控L9981肺癌细胞株基因和蛋白表达水平，发挥抑制肺癌生长和促进肺癌凋亡的作用。
展开▼
