H3/H1流感血凝素真核表达质粒构建及在HeLa细胞中的表达

摘要

通过PCR分别改造已获得的H1亚型HA1和H3亚型HA基因片段，在融合片段间引入(G4s)3柔性linker和口蹄疫2A蛋白linker。采用NAstar结合生物信息学软件InsightⅡ分析后对其空间构象进行模拟和评价。将融合表达H1HA1和H3HA的基因片段克隆至真核表达载体pVAX1 CMV启动子下游。通过脂质体法转染HeLa细胞，进行RT-PCR与间接免疫荧光检测。结果表明，成功构建了表达双亚型(H3/H1)流感病毒血凝素真核表达载体pVAX1-H3HA-H1HA1，RT-RCR表明重组质粒在转染HeLa细胞后出现了目的基因的转录，IFA证实目的基因在HeLa细胞上可有效表达。真核表达质粒pVAX1-H3HA-H1HA1可以在HeLa细胞中正确转录与表达，为抗H3、H1亚型流感病毒双价核酸疫苗的研究奠定了基础。