金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白CS6B的纯化研究

摘要

金属螯合亲和层析是近30年来出现的一种亲和层析技术,也称固相化金属离子亲和层析。该方法是利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基和载体之上的金属离子之间的相互作用而进行的亲和纯化。目的蛋白质表面暴露的供电子氨基酸残基,如组氨酸的咪唑基,半胱氨酸的巯基和色氨酸的吲哚基,十分有利于蛋白质与固定化金属离子结合,这是IMAC用于蛋白质分离纯化的根据。在制备亲和介质时,常用的金属离子有Cu2+、Zn2+、Ni2+、Co2+等,常用的螯合配基有亚氨基二乙酸(IDA)、三羧基甲基乙二胺(TED)、次氨基三乙酸(NTA)等。本文以柱层析用粗孔硅胶为载体,KH-560为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有CO2+的金属螯合亲和层析介质分离纯化六聚组氨酸融合蛋白CS6B。