狂犬病毒ERA株糖蛋白在小鼠骨髓瘤细胞中的表达研究

摘要

根据狂犬病毒糖蛋白(G蛋白)免疫活性及免疫特性,参考有关文献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析,选取狂犬病毒ERA株糖蛋白膜外区的基因片段设计扩增引物,在上、下游引物中引入BamHⅠ和EcoRI限制性酶切位点。并在下游引物5'端添加了His-tag。用分子克隆的方法将目的基因插入真核表达载体质粒pcDNA3.1(+)中,构建表达载体pcDNA3.1-RG,进行核酸序列测定。用真核表达载体pcDNA3.1-RG,通过脂质体介导法转染小鼠SP2/0和NS0骨髓瘤细胞,利用夹心ELISA方法和荧光抗体方法进行检测。结果检测到重组真核表达质粒pcDNA3.1-RG在SP2/0和NS0骨髓瘤细胞中均进行了瞬时表达。此方法的建立为研究大量分泌表达狂犬病毒ERA株糖蛋白奠定了基础,也为研发防治狂犬病的新型免疫制剂和诊断方法打下良好的基础。