重组(R)-专一性羰基还原酶的表达、纯化及酶学性质

摘要

通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析,根据其保守性利用PCR技术得到目的基因rcr.该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸.通过构建重组质粒pETRCR,使目的基因在Escherichia coli BL21(DE3)中表达.研究发现,在重组菌培养过程中不添加IPTG诱导培养更有利于该基因的表达.利用HisTrap亲和层析纯化得到了目的重组酶,该酶在pH 6.0以及45°C的条件下分别表现出较高的酶活.在底物选择性方面,该重组酶催化还原乙醛的活性很高,而对于酮类化合物,其对中链长度的底物专一性较强.通过考察金属离子对酶活的影响,发现该重组酶是一种含锌的金属酶,锌离子对该酶的活性有激活作用。