重组牛γ干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定

摘要

本研究分别以真核表达质粒pVAX1-PreBovlFN-γ和纯化的原核表达融合蛋白rHis-BovlFN-γ为免疫原,并以纯化的融合蛋白rGST-BovlFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出4株稳定分泌抗rBovIFN-γ单克隆抗体的细胞株,分别命名为4C7、3H5、2D9、3E4,免疫球蛋白亚类鉴定依次为IgM、IgG2b、IgG1、IgM,杂交瘤培养上清间接ELISA效价为1:1600、1:3200、1:1600、1:1600,腹水效价为1:25600、1:51200、1:25600、1:12800,Western-blotting分析显示,4株单抗均能特异性结合22kD的rHIS-BovlFN-γ和42kD的rGST-BovlFN-γ,Dot-ELISA试验表明,4株单抗只与融合蛋白rHIS-BovlFN-γ和rGST-BovlFN-γ反应,而不与rHIS-ChIFN-γ、rGST-ChIFN-γ、rHIS-ChlL-2反应,表明4株单抗均为针对rBovlFN-γ的特异性单抗.本研究为进一步研究rBovlFN一γ单抗在研究牛免疫细胞功能、牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定了基础.