羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆、测序及表达载体的构建

摘要

为获得羊痘病毒(Capripoxvirus,CaPV)膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列(DNA)设计合成了1对特异性引物,对CaPVP32基因进行PCR扩增,产物大小约为969bp,回收纯化后,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化TOP10E.coli感受态细胞,经核苷酸序列分析,与已报道的多株CaPV编码膜蛋白P32的DNA基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与GPV毒株的同源性高达99﹪,氨基酸序列同源性为98﹪,证实为CaPV的P32基因.成功构建了CaPVP32基因重组表达载体.经L-Araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达CaPVP32抗原.表达蛋白为融合蛋白,分子量约51.53KDa。