SPA协同凝集试验检测日本脑炎病毒抗体水平的研究

摘要

以日本脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus,JEV)囊膜蛋白基因和猪IgG基因序列模扳,设计两对特异性引物,扩增JEV囊膜蛋白Ⅰ、Ⅱ抗原域基因(E)和猪IgG重链CH3区.E和CH3片段串联克隆入表达载体pET-32a(+)构建重组质粒pET-E-CH3.重组质粒经1.0mmol/LIPTG诱导在BL21(DE3)中以包涵体的形式获得高效表达.选择高产SPA蛋白的金黄色葡萄球菌CowanⅠ株制备SPA稳定菌液.将纯化的重组蛋白与SPA稳定菌液结合,作为检测血清中乙脑抗体水平的诊断抗原.利用此诊断抗原与标准阴、阳性血清反应,建立了检测乙脑抗体水平的SPA协同凝集试验.结果表明:凝集试验方法简单、直观、不需要高值仪器、便于推广,为大群血清流行病学检测的好方法。