过表达Beclin1增强自噬抑制舌鳞癌细胞增殖及侵袭转移

摘要

目的：探讨上调Beclinl表达诱导自噬对舌鳞癌细胞增殖及侵袭转移的影响。rn 方法：1.构建Beclinl过表达的慢病毒载体系统;2.分别感染舌鳞癌细胞系SCC9,SCC15，并筛选Beclinl过表达的稳定细胞株;3.Rea1 time RT-PCR,Western Blot检测Beclin1基因的上调效果;4. Western blot检测自噬关键基因ATG4,ATG5和LC3以及肿瘤转移相关基因VEGF,MMP-2和MMP-9的表达变化;S.CCk-8法检测细胞增殖能力;6.Transwell小室检测细胞迁移、侵袭能力;6.将SCC9-Beclinl ,SCC9-vector,SCC9三组细胞，分别接种至裸鼠;7观察成瘤情况并记录至瘤块最长直径达lcm，处死裸鼠后解剖取下瘤块，并称重量;8.免疫组织化学染色检测自噬标记物Beclin 1在瘤体的表达情况。rn 结果：1.Rea1 time RT-PCR和Western Blot结果显示:经GAPDH内参校正，SCC9和SCC 15细胞NC组与CON组的Beclinl在mRNA和蛋白水平表达比较均无统计学意义(P<0.05);0E组细胞中Beclin 1在mRNA和蛋白水平的表达明显上调(P<0.05);2.在蛋白水平上，自噬关键蛋白ATG4,ATG5和LC3II的表达均升高，肿瘤转移相关蛋白VEGF,MMP-2和MMP-9表达有不同程度的下降;3.细胞的增殖活性降低;4.细胞的侵袭转移能力下降。5.在体内，过表达Beclin 1的舌鳞癌细胞，其瘤体较对照组体积小、重量轻。rn 结论：细胞内的自噬水平与舌鳞癌的增殖及侵袭转移相关。上调Beclin 1表达可增强舌鳞癌细胞自噬活性，并抑制其增殖及侵袭转移，其作用机制可能与通过降低VEGF,MMP-2和MMP-9的表达有关。