E.acervulina广东株3-1E基因酵母表达质粒的构建

摘要

以E.acervulina广东分离株裂殖子RNA为模板,应用"套式PCR"扩增了部分3-1E基因序列(长度682nt),将其克隆至pGEM-T Easy载体,测序结果显示,它与GenBank中登记的3-1E基因的核苷酸同源性为99﹪,推导氨基酸同源性为98.2﹪;命名鉴定正确的质粒为pGEM-3-1E.以pGEM-3-1E为模板,扩增获得序列两端分别含有EcoR I和Xba I酶切位点的3-1E基因(长度529nt),用这两种酶酶切PCR产物,通过电泳回收目的片段;将3-1E基因克隆至相同酶切、回收的巴斯德毕氏酵母分泌型表达载体pPICZ<,α>C载体中,测序结果表明,E.acervulina广东分离株3-1E基因已克隆至pPICZ<,α>C真核表达载体中,并且阅读框架正确.