不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3的影响

摘要

目的:观察不同转膜时间对免疫印迹法检测自噬蛋白LC3条带的影响.方法:利用他莫昔芬诱导人乳腺癌MCF7细胞自噬,高内涵成像系统观察LC3表达.提取总蛋白,使用聚丙烯酰胺凝胶电泳,0.22μm孔径PVDF膜,72伏分别电转15、30、45、60、75、90分钟,封闭,漂洗后加LC3一抗、二抗孵育.结果:LC3条带在30、45、60分钟时逐渐加深;75、90分钟时条带逐渐减弱,45分钟时LC3BⅠ及Ⅱ条带更为明显.结论:LC3Ⅰ、Ⅱ转膜时间最短可为15分钟,最佳显示时间为45分钟.