氧化应激对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞内角质细胞生长因子受体酪氨酸激酶的影响

摘要

目的：探讨活性氧ROS对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC(Ⅱ))内角质细胞生长因子受体(KGFR)酪氨酸激酶(RTKs)影响。方法：原代培养胎鼠AECⅡ,待其生长至亚融合状态时,随机分为H2O2组和NAC+H2O2组。置于培养箱分别培养Omin,5min,10min,20min,40min,80min.流式细胞仪检测两组各时间点ROS水平；Western-Blot检测H2O2组各时间点KGFR表达水平；免疫沉淀和western-blot方法检测两组各时间KGFR酪氨酸激酶磷酸化水平。采用SPSS16.0软件进行方差分析及t检验。结果：1.5min,40min,80 min, H2O2组和NAC+H2O2组同空气对照组相比，ROS水平显著提高。2. H2O2组各时间点KGFR表达水平不变(F检验，p>0.05)。3.与Omin (1.0009±0.0023)比较，H2O2组5min, lOmin,20min,40min各时间点产生的ROS激活KGFR酪氨酸激酶，使其磷酸化水平升高，且5min时磷酸化水平最高(2.7641±0.0338,p=0.000 ) ,40min (1.7465±0.0243, p=0.000)后酪氨酸磷酸化渐消失，80min (1.0367±0.0208, p=0.093)时完全消失。4. NAC+H2O2组各时间点KGFR酪氨酸磷酸化趋势较前一致，但磷酸化水平较H2O2组显著减低。结论氧化应激(ROS)激活胎鼠ASCIIKGFR酪氨酸激酶，使磷酸化KGFR水平升高，从而抑制KGF对高氧肺损伤的保护作用。