犬新孢子虫AMA1基因真核表达质粒的构建及在Vero细胞中的表达

摘要

为构建犬新孢子虫AMA1基因的真核表达重组质粒,了解其在体外的表达情况.本试验采用RT-P-CR方法扩增牛源犬新孢子虫吉林株AMA1全长基因,构建了真核表达重组质粒PVAX1-NcAMA1；利用脂质体介导转染法将该重组质粒转染至Vero细胞,应用间接免疫荧光检测方法(IFAT)和western blot技术检测AMA1基因在Vero细胞中的表达.结果显示,扩增的吉林株牛源犬新孢子虫AMA1基因长度为1695bp,与GenBank中相应基因序列(AB265823.1)同源性为99.9％.成功构建了真核表达重组质粒PVAX1-NcAMA1,IFAT检测NcAMA1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,表达产物经western blot鉴定,其分子量约为68kDa,且具有较好的反应原性.本试验为新孢子虫核酸疫苗的进一步研究打下了基础.