BVDV-2 E2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要

根据GenBank登录的BVDV-2 E2基因序列,设计特异性引物,对BVDV-2新疆SW分离株E2基因进行RT-PCR扩增,克隆入T载体中测序,然后亚克隆入酵母(P.Pastoris)分泌型表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-E2.用SalⅠ酶切线性化重组质粒pPIC9K-E2,电转化P.Pastoris GS115,通过G418筛选重组酵母菌GS115-pPIC9K-E2,用1.5％甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析证实表达的重组融合蛋白相对分子量为23.2 Kda;Western blot分析表明该重组蛋白可与BVDV-2多克隆抗体发生特异性血清学反应,证实表达的重组E2蛋白具有良好的反应原性,为BVDV-2诊断试剂研发奠定基础。