新城疫病毒La Sota C5株感染性克隆的构建及病毒拯救

摘要

将本实验室保存的一株La Sota病毒用有限稀释法接种鸡胚进行纯化,连续传代五次后筛选到一株高血凝效价的纯培养克隆株,命名为La Sota C5,并对其进行全基因组测序;参照La Sota C5株全基因序列单酶切位点,用RTPCR的方法将基因组分8段扩增,并按照病毒基因组的结构顺序,将克隆片段定向插入到TVT转录载体中,至此含有病毒全长cDNA的转录载体TVT-La Sota C5成功构建。将TVT-La Sota C5与构建的辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCIL按照5:3:2:1的比例共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的La Sota1株新城疫病毒。病毒的成功拯救为后续基因功能和疫苗载体开发等方面的研究提供了平台。