IBV多表位EpiC四种表达型重组乳酸菌的构建、表达优化及其对SPF鸡免疫效果研究

摘要

本研究成功构建能够分别通过胞内、分泌、增强分泌和锚定表达禽传染性支气管炎病毒(IBV)多表位肽Epic的四种重组乳酸菌NZ3900/pNZEpiC、NZ3900/pNZSPEpiC、NZ3900/pNZSPLEpiC及NZ3900/pNZSECSPA。表达优化结果表明:添加10ng/mL的nisin，并继续诱导培养4h，重组菌Epic的表达量最高，产量分别为62.60mg/L和21.84mg/L;离心分离诱导菌体后，分泌型重组乳酸菌能够在新鲜无nisin的培养基中内持续表达并分泌Epic，胞内部分在6h内、培养基上清在4h内能直接通过SDS-PAGE技术检测到目的蛋白。攻毒试验结果显示，口服免疫组NZ3900/pNZEpiC、NZ3900/pNZSPEpiC、NZ3900/pNZSPLEpiC及NZ3900/pNZSECSPA的攻毒保护率分别为75%、45%、80%、85%，明显优于滴鼻免疫组，因此乳酸菌活载体疫苗在应用上具有一定的竞争优势。