快速诊断小鹅瘟PCR方法的优化建立

摘要

为建立快速确诊小鹅瘟的PCR方法,根据已发表的GPV VP3基因序列,经多序列比对分析设计检测GPV的特异性PCR引物。分别以酚氯仿法、煮沸法和微量法提取病鹅肝组织中病毒核酸,对比三种核酸提取法的检测敏感度,并优化引物退火温度和PCR循环次数,鉴定其特异性。结果显示,建立的PCR检测方法能够检测临诊病料中的GPV病原基因,其扩增片段大小为343nt,最佳退火温度为58℃,最佳循环次数为35次。微量法所获病毒核酸PCR检测敏感性高于其它两种方法,其最高可检测以微量法提取病毒基因组的104倍稀释液,且不与鹅副黏病毒、禽流感病毒、鸭瘟病毒发生交叉反应。本研究建立的GPV快速PCR检测方法适用于基层兽医诊疗部门快速确诊小鹅瘟。