鸡源志贺菌IpaC基因的克隆及原核表达

摘要

本研究对鸡源志贺氏菌IpaC片段进行了基因克隆、重组表达和蛋白纯化.应用PCR方法从志贺氏菌毒力大质粒中扩增出大小1092bp的lpaC基因.与国内外发表的10株人源志贺氏菌IpaC序列的同源性分析表明,其核苷酸序列的同源性在95.3％-99.8％之间,氨基酸序列的同源性在96.4％-99.7％之间,进化树结果显示与参考株AL391753相似性较大,它们在同一个分支上.将IpaC基因克隆至载体pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET32a(+)-IpaC,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示:在相对分子量约63kDa处出现条带,而对照组无条带产生.蛋白经Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化后纯度可达90％以上.