慢病毒介导的表达绿色荧光蛋白(GFP)转基因鸡研究

摘要

禽类生殖系统和胚胎发育的特殊性,使禽类转基因技术的研究落后于哺乳动物.慢病毒载体作为制备转基因家禽基因转移的工具已被证明具有高效性和稳定整合性.本研究用慢病毒载体,采用赤道开窗法将表达GFP重组慢病毒注射入新生种蛋胚盘下腔制备转基因鸡,通过PCR、RT-PCR、Southern、Western方法鉴定.鉴定阳性的转基因鸡经Tail-PCR分析外源基因的整合位点.转基因阳性鸡(TG)与野生型鸡(WT)交配繁育F1代,荧光显微镜下观察F1代TG鸡组织GFP的表达,F1代阳性鸡与WT鸡交配繁育F2代.成功获得表达GFP的转基因鸡,整合位点分析表明GFP整合到鸡基因组4号染色体.繁育至F2代,在血液与组织中能够检测到外源基因,表明外源基因能稳定遗传,并建立微核心群单元.