牛副流感病毒3型(BPIV3)荧光实时定量PCR检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用

摘要

目的：建立用于牛源性样品本牛副流感病毒3型(BPIV3)实时荧光定量PCR(Q-PCR)快速检测方法. 方法：选择已发表的牛副流感病毒3型(BPIV3)HN基因高度保守区域作为靶基因,设计合成引物和探针,建立BPIV3Q-PCR方法.并对方法的线性、特异性、敏感性、重复性稳定性等进行方法学评价.同时用建立的Q-PCR方法检测105批次牛源性样本. 结果：建立的BPIV3Q-PCR方法线性范围为1×101copies/μL～1×108copies/μL;与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应;检测敏感度可以达到1.0×101copies/μL;3个不同浓度梯度标准品3次不同实验平均变异系数均小于5％.应用建立的方法检测105批次牛源性样本,BPIV3核酸阳性率为12.4％. 结论：建立的BPIV3Q-PCR检测方法线性关系良好,具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本BPIV3的快速定量检测.