实时荧光定量TaqMan-PCR检测小鼠多瘤病毒方法的建立

摘要

目的：建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒(Murine polyomavirus,MPyV)荧光定量TaqMan-PCR检测方法,用于MPyV核酸的检测. 方法：根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增长度为69bp的片段,通过优化反应体系和反应条件,对构建的重组质粒标准品进行检测,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验.最后用建立的方法对人工感染MPyV的肺脏、脾脏和粪便,及86份小鼠临床样本进行检测,验证在临床应用中的效果. 结果：所建立的检测方法特异性强,只能在小鼠多瘤病毒DNA中检出荧光信号,检测灵敏度达到100拷贝,批内和批间重复性好,检测结果变异系数(CV)均小于1.13％,人工感染MPyV小鼠的肺脏、脾脏和粪便均为阳性,对86份临床样本进行检测,有3份样本呈阳性(阳性率为3.5％). 结论：建立的MPyV荧光定量TaqMan-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合用于MPyV临床诊断、日常监测和流行病学调查.