人血白蛋白中未知蛋白的生物质谱研究

摘要

目的：建立基于生物质谱技术的人血白蛋白中未知组分的检测方法,为人血白蛋白生产工艺提升提供技术支持. 方法：采用凝胶过滤色谱柱(Hiprep16/60SepharylS-200HR),以磷酸二氢钠-磷酸氢二钠溶液(0.5mol/L磷酸二氢钠200mL,0.5mol/L磷酸氢二钠420mL,异丙醇15.5ml,纯水914.5ml,调节pH至6.98)为流动相等度洗脱,对人血白蛋白中的各组分进行分离,并收集其中的未知组分;经除盐、浓缩和胰蛋白酶酶解后,采用BEHC18(100×2.1mm,130(A)色谱柱,以水(含0.1％甲酸)-乙腈流动相梯度洗脱,采用色谱-质谱(MS)技术对多肽进行二级质谱序列测定,并利用搜库软件(PLGS3.0)分析鉴定其人血白蛋白中未知组分. 结果：利用所建立的方法对5家企业的15批人血白蛋白进行了测定,共检测出21种未知蛋白,其中载脂蛋白A-Ⅱ(Apolipoprotein A-Ⅱ)、人结合珠蛋白(Haptoglobin)、人血色素结合蛋白(Hempoexin)、α-1B-糖蛋白(Alpha-1B-glycoprotein)与α-2-HS-糖蛋白(Alpha-2HS-glycoprotein)等5种蛋白为5家企业产品共有的未知蛋白;5家企业产品未知蛋白种类数量差异较大. 结论：本方法可用于人血白蛋白中未知组分的研究,为人血白蛋白的生产工艺的优化提供了指导.