西藏小型猪生长激素受体基因的克隆、真核表达质粒的构建及其在胚胎成纤维细胞中的表达

摘要

目的：克隆西藏小型猪的生长激素受体(GHR)基因的cDNA序列,构建GHR基因真核表达质粒,在胚胎成纤维细胞(PEFs)中表达. 方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对西藏小型猪的GHR基因的cDNA进行克隆,并构建了GHR-pIRES2-EGFP真核表达质粒,转染到西藏小型猪的胚胎成纤维细胞上进行瞬时表达,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞的IGF-1表达的情况. 结果：测序结果显示：西藏小型猪GHR基因的序列片段长1934bp,包含编码区1721bp,该编码区编码了572个氨基酸,重组质粒GHR-pIRES2-EGFP经过NheⅠ与SalⅠ双酶切后,得到5308bp和1934bp的条带;真核表达质粒成功转染PEFs后,检测到IGF-1表达量上调的更高. 结论：为进一步研究GHR基因的功能及信号的转导奠定了基础.