DKK1转基因体细胞克隆西藏小型猪的制备

摘要

目的:DKK1基因是wnt通路的阻断因子,有研究显示,在小鼠皮肤特异性过表达DKK1基因,会导致小鼠出现无毛表型.本研究利用转基因体细胞核移植的方法制备皮肤特异性过表达DKK1基因的转基因体细胞克隆西藏小型猪,以创制无毛西藏小型猪.方法:1.构建携带西藏小型猪DKK1基因的慢病毒载体pERKDZG;2.借助慢病毒将DKK1导入西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs);3.通过体细胞核移植技术制作DKK1转基因体细胞克隆西藏小型猪.结果:成功构建携带猪DKK1基因的慢病毒载体pERKDZG,并利用该慢病毒将西藏小型猪DKK1基因导入PEFs,进而流式分选获得纯的经遗传修饰的PEFs(命名为PEF-DKK1),以其作为核供体细胞.通过体细胞核移植技术,成功获得8头克隆猪,经PCR鉴定和荧光检测,证实其中3头为DKK1转基因阳性的克隆猪.结论:通过转基因体细胞核移植技术,成功制备DKK1转基因西藏小型猪.