基于双峰驼单域抗体库的蒜氨酸酶抑制剂的筛选和鉴定

摘要

近年来，多种酶抑制剂已逐步作为治疗性药物用于临床疾病的治疗，目前的上市药物中，以酶为靶点的药物占20%以上，因此，以酶为靶点的新药开发存在巨大潜力，而且随着分子生物学的发展，提出了更多基于特异性酶抑制剂的药物研发需求．骆驼体内存在一种缺失轻链仅具有两条重链的IgG抗体,称为重链抗体(heavy chain antibody,HCAb).重链抗体可变区VHH(variable domain of the heavy chain of HCAb)可优先结合酶活性中心位点,是潜在的酶抑制剂来源.为建立基于重链抗体VHH单域抗体库构建的酶抑制剂筛选平台,采用铰链特异引物,从蒜氨酸酶免疫的双峰驼外周血淋巴细胞中一步克隆获得两种不同亚型重链抗体VHH基因,构建噬菌体展示VHH单域抗体库,通过生物亲和淘洗,从中筛选获得具有蒜氨酸酶特异结合活性的单域抗体片段VHH A4,进行原核表达并纯化,Western blot免疫印迹验证融合抗体GST-VHH A4具有蒜氨酸酶特异结合活性,酶抑制活性分析显示VHH A4具有显著的酶抑制活性,IC50值约为20 nmol/L,该结果提示来自双峰驼HCAb可变区的单域抗体库可作为潜在酶抑制剂的筛选平台.