从白血病干细胞水平研究蝎毒多肽提取物逆转多药耐药机制

摘要

目的：探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)对白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响. 方法：培养K562/A02细胞,在对数生长期收集并经免疫磁珠法分选出K562/A02干细胞备用;40只BABL/c裸鼠,取5只注射K562/A02干细胞形成皮下瘤块备用;采用随机数字表法将35只小鼠分为正常对照组、模型组、耐阿霉素(Adriamycin,ADM)组、PESV组和ADM+PESV高、中、低剂量组,每组5只.正常对照组不作处理,其余各组包埋瘤块组织,造模后模型组给予1mL生理盐水腹腔注射,每天1次;ADM组腹腔注射ADM0.05mg,隔天1次;PESV组腹腔注射PESV2μg,每天1次;ADM+PESV高、中、低剂量组腹腔注射ADM0.05mg,隔天1次,同时给予PESV(5、2、1μg)腹腔注射,每天1次.给药14天.流式细胞术检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp);RT-PCR检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药基因1(multidrug resistance1,MDR1)mRNA表达;免疫组化法检测乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase1,ALDH1);Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3-K)蛋白;ELISA检测核转录因子NF-κB含量. 结果：K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率分别为31.5％、92.8％,耐药率(IC50)分别为(60.33±10.68)μg/mL、(58.33±9.72)μg/mL.造模组裸鼠成瘤率100％.与模型组比较,ADM组各项检测指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05);PESV组BCRP、MDR1mRNA和NF-κB因子水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);ADM+PESV高、中、低剂量组P-gp值降低,PI3-K蛋白表达下调(P<0.05),ADM+PESV高、中剂量组BCRP mRNA表达降低,MDR1mRNA表达升高,差别均有统计学意义(P<0.05),ADM+PESV高剂量组PI3-K蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05).分别与ADM组和PESV组比较,ADM+PESV高剂量组P-gp、BCRP mRNA、MDR1mRNA、PI3-K和NF-κB水平明显均下调,差异有统计学意义(P＜0.05).各组ALDH1阳性率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论：PESV联合ADM具有下调白血病K562/A02干细胞P-gp、BCRP、MDR1、PI3-K、NF-κB的表达水平,可以增强白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,具有逆转其多药耐药作用.