鉴别NADC30-like PRRSV、HP-PRRSV及Classical PRRSV的RT-PCR诊断方法的建立及应用

摘要

根据GenBank登录的类NADC30(NADC30-like)、高致病性(highly pathogenic,HP)与经典(Classical)PRRSV Nsp2基因序列,设计了1对引物,建立一步鉴别诊断NADC30-like、HP及Classical PRRSV的RT-PCR检测方法.结果表明,该方法能从NADC30-like、HP及Classical PRRSV基因组中分别扩增出628,931,1021bp的特异性片段,病毒基因组混合后能够同时扩增.敏感性试验结果表明该方法能检测分别检测到0.54,5.17,9.25pg的核酸含量;特异性结果表明该方法在同等条件下检测PRV、CSFV、PCV2、JEV、PEDV、TGEV、RV、SIV均为阴性.对2014-2016年采集的396份临床样品进行检测,27份为NADC30-like PRRSV,74份为HP-PRRSV,5份为Classical PRRSV.本研究建立的RT-PCR诊断方法,具有特异、灵敏、快速等特点,可用于一步区分NADC30-like、HP及Classical PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段.