细胞色素P450氧化酶BM3催化甾体羟基化的研究

摘要

目的：BM3突变体M01A82W、M01A82WS72I,M11A82W能够在不同的位点羟基化化睾酮和炔诺酮,因此使他们成为具有巨大潜能的羟基化甾体的催化剂.为了获得更多羟基化的甾体前体,很有必要探究这些BM3突变体的底物多样性. 方法：3个纯化了的BM3突变体首先以睾酮,甲睾酮,胆固醇,β-谷甾醇,脱氢表雄酮,薯蓣皂苷元,孕烯醇酮和麦角甾醇等8种甾体为底物.为了进一步验证实验结果,又精心挑选了3个结构为3-羰基-4-双键的的甾体和2个结构为3-羟基-5-双键的甾体为底物进行催化反应. 结果：3种BM3突变体能够在不同的位点羟基化结构为3-羰基-4-双键的睾酮,甲睾酮、黄体酮、雄烯二酮和17α-OH黄体酮.相反,对8个结构为3-羟基-5-双键的甾体无任何催化活性. 结论：BM3突变体可能更偏爱3-羰基-4-双键的甾体,即它们的底物特异性.这些结果拓展了我们对BM3突变体的甾体底物杂泛性的了解,从而扩大其作为生物催化剂的综合应用.