水解蛋白铁肽制备分离纯化及其生物活性研究

摘要

利用木瓜蛋白酶水解带鱼蛋白及氯化亚铁螯合制备得到生物活性亚铁螯合肽,首先利用两次超滤分级制备了带鱼蛋白亚铁螯合肽粗提液,再经Sephadex G-25凝胶层析柱进行分离纯化,得到了具有最强抗菌活性的带鱼蛋白亚铁螯合肽组分(F1).最后利用制备型高效液相色谱柱对F1进一步纯化,得到了分子量在1000以内的有抗菌活性的亚铁螯合小肽活性组分(F1-2),其蛋白含量为70.45％.在此基础上,对组分F1-2进行了理化性质分析,并研究其对金黄色葡萄球菌抗菌机制.实验结果表明,带鱼蛋白亚铁螯合肽对金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用,MIC及MBC分别为0.125mg/mL及0.5mg/mL,带鱼蛋白亚铁螯合肽使金黄色葡萄球菌细胞内容物大量渗漏而死亡,死亡细胞的细胞壁保持完整,表明细胞膜是抗菌肽作用的主要靶位点.