PI3K/Akt/Nrf2信号通路在电针刺减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用

摘要

目的：评价磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在电针刺减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤中的作用. 方法：健康清洁级雄性新西兰大白兔80只,2月龄,体重1.5～2.0kg,采用随机数字表法分为8组(n=10):对照组(C组)、内毒素休克诱发急性肺损伤模型组(L组)、PI3K/Akt抑制剂-渥曼青霉素+内毒素休克诱发急性肺损伤组(WL组)、渥曼青霉素组(W组)、二甲基亚砜组(D组)、模型+电针刺组(EL)、模型+电针刺激非穴位组(SEL)、模型+电针刺+渥曼青霉素组(ELW).EL组、ELW组于模型制备前1～4d及模型制备过程中电针刺激兔双侧足三里和肺俞穴,30min/次,1次/d,采用疏密波,频率2/15Hz,刺激电流1～2mA,波宽0.2～0.6ms,刺激强度以兔肢体出现轻微肌颤为宜,SEL组采用同样方法电针刺激足三里和肺俞穴旁开0.5cm处.L组、WL组、EL组、SEL组和ELW组经耳缘静脉注射脂多糖LPS5mg/kg(溶于2ml生理盐水)以制备内毒素休克诱发急性肺损伤模型,C组、W组和D组给予等容量生理盐水.于模型制备前30min,WL组、W组和ELW组静脉注射渥曼青霉素0.6mg/kg(溶剂为0.08ml/kg DMSO),D组注射0.08ml/kg DMSO,C组、L组注射等容量生理盐水.静脉注射LPS或生理盐水后6h时,采集动脉血样,检测血清TNF-α和IL-10浓度,处死动物后留取肺组织,进行病理学损伤评分,测定肺组织SOD活性及MDA含量以及检测p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白、HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平. 结果：与C组比较,L组、WL组、EL组、SEL组和ELW组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高而IL-10浓度及SOD活性降低肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白,HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平上调(P＜0.05),W组、D组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与L组比较,EL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量降低,而IL-10浓度及SOD活性升高,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白,HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平上调,WL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而IL-10浓度及SOD活性降低,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白,HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平下调(P＜0.05),而SEL组上述各指标差异无统计学意(P＞0.05);与EL组比较,ELW组组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而-10浓度及SOD活性降低,肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白,HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平下调(P＜0.05);与ELW组比较,WL组肺损伤评分、血清TNF-α浓度及肺组织MDA含量升高,而IL-10浓度及SOD活性降低肺组织p-Akt蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白,HO-1mRNA、Nrf2mRNA表达水平下调(P＜0.05). 结论：PI3K/Akt/Nrf2信号通路介导电针刺激足三里和肺俞穴减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤的作用,其机制可能与上调HO-1表达有关.