左归丸与右归丸对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

摘要

目的：比较左归丸与右归丸促成骨分化的影响及作用机制. 方法：无菌培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),分别制备左归丸和右归丸高、低剂量含药血清,分为对照组(CON组)、左归丸低剂量组(ZD组)、左归丸高剂量组(ZG组)、右归丸低剂量组(YD组)和右归丸高剂量组(YG组).采用CCK8、碱性磷酸酶(AKP)试剂盒、ALP染色检测各组细胞增殖、成骨活性和分化能力,RT-qPCR检测FNDC5、Runx2、Osterix、BMP2、Tgif2和PPARγmRNA表达,Western blot检测FNDC5、Runx2、BMP2蛋白表达. 结果：CCK8显示各组细胞7d内增殖呈上升趋势;含药血清干预3d,ZG组AKP活性明显高于其余各组(P＜0.01);干预7d,ZD、ZG、YG组AKP活性明显高于CON组(P＜0.01),且ZG组AKP活性明显高于YD、YG组(P＜0.05,P＜0.01);ALP染色显示干预3、7d各含药血清组ALP染色阳性率均高于CON组,其中ZG组更为明显(P＜0.01).PT-qPCR显示,含药血清干预第3天ZG、YG组BMP2表达高于CON组(P＜0.05),第7天ZG组Runx2、Osterix显著高于CON组(P＜0.05,P＜0.01),各组Tgif2和ZG、YG组PPARγ表达显著低于CON组(P＜0.05,P＜0.01);Western blot显示,干预3d时ZG组FNDC5蛋白表达水平高于CON、YD和YG组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平明显高于CON组(P＜0.05),ZG和YG组Runx2蛋白表达水平较ZD和YD组明显升高(P＜0.05);干预7d时,ZG组FNDC5蛋白表达水平明显高于CON、ZD、YD组(P＜0.05);各组BMP2、Runx2蛋白表达水平较CON组均明显升高(P＜0.05),ZG组BMP2、Runx2蛋白表达水平均高于YD和YG组(P＜0.05). 结论：左归丸和右归丸均能一定程度促BMSCs成骨分化,其中左归丸在促进成骨活性及成骨分化能力略强于右归丸.二者促成骨分化的差异可能与其上调FNDC5、BMP2、Runx2表达程度相关.