Annexin V靶向纳米级微泡造影剂在凋亡介导的抗肿瘤疗效评价中的应用研究

摘要

目的：探讨连接Annexin V的纳米级靶向超声造影剂在在凋亡介导的抗肿瘤疗效评价中的应用研究. 方法：采用本课题组之前优化的薄膜水化法制备本研究所需的Annexin V靶向纳米级微泡.用红色膜荧光染料DiI进行微泡表面标记.体内超声成像前,先检测其体外显影效果,并以声诺维SonoVue和PBS进行对比.体内实验部分,首先以特定剂量(1.25mg/kg)顺铂为化疗药,诱导裸鼠异位移植瘤发生凋亡,对照组荷瘤小鼠给予等量生理盐水.TUNEL法、蛋白免疫印迹及流式细胞仪检测凋亡率.后行荷瘤小鼠超声造影,先给予麻醉处理,各组3只小鼠,分别尾静脉注射200μl Annexin V靶向纳米级微泡、非靶向纳米级微泡和SonoVue.观察并记录各组小鼠肿瘤区超声声像图变化情况.造影结束,体外免疫荧光检测. 结果：所制备的AnnexinV靶向纳米级微泡粒径约为（635.5±25.4）nm，Zeta电位约为（-30.22±2.07mV）mV；体外显示其与SonoVue具有相似的显影增强效果；体内造影结果表明，AnnexinV靶向纳米级微泡在顺铂治疗组小鼠肿瘤区达峰时间较SonoVue晚（70svs40s），但是造影呈现明显高增强，且信号较SonoVue(88.795±4.38vs50.736±3.49，p<0.05)和对照组非靶向纳米级微泡强（88.795±4.38vs63.237±4.20，p<0.05），且增强信号持续时间较SonoVue和对照组纳米级微泡长。体外免疫荧光检测AnnexinV靶向纳米级微泡在顺铂治疗组小鼠肿瘤区血管外大量分布，且与凋亡相关蛋白CleavedCaspase-3的大量重叠，对照组纳米级微泡则无此现象，对照组SonoVue只分布在血管内，血管外无分布。对顺铂治疗组小鼠肿瘤、肝脏及肾脏解剖后观察可见AnnexinV靶向纳米级微泡在肿瘤组织区大量富集，对照组纳米级微泡只出现少量富集于肿瘤组织，两种造影剂在肝脏、肾脏基本已被代谢，结果与超声造影一致。 结论：Annexin V靶向纳米级微泡超声显影效果明显，可与顺铂治疗后荷瘤小鼠肿瘤凋亡细胞靶向性结合，表明其在凋亡介导的抗肿瘤疗效评价具有重要作用。