小胶质细胞在PRV感染中动态变化的研究

摘要

本研究主要建立伪狂犬病毒感染的小鼠模型,进一步研究在病毒感染过程中小胶质细胞的动态分子变化.实验小鼠为6周龄BALB/C雄性小鼠,采用PRV-Bartha K61毒株,通过腿部皮下注射攻毒建立感染模型.运用小胶质细胞的表面特异抗体CD11b、Iba1、MHCII、Ly6C、Gr1、CD45等标记小胶质细胞,注射BrdU分析增殖小胶质细胞来源,通过免疫磁珠法、免疫组化、激光共聚焦及流式细胞术等技术,进一步分析PRV感染中小胶质细胞的动态变化.实验结果显示PRV感染小鼠后可以造成一定的致死率，其致死率与感染剂量成正比;PRV感染小鼠后主要导致脑部病变，HE染色分析表明攻毒后小鼠脑组织小胶质细胞增多;感染后第3天己经出现病变，在感染后5到6天，病变程度最严重，感染后10天病变己经不明显。Ibal和MHC且免疫组化标记小胶质细胞，其形态发生改变，由静息状态的分枝状变为活化的椭圆形;流式细胞术分析可知，攻毒后小胶质细胞由静息状态CD45低表达变为活化状态CD45中表达，同时攻毒后小胶质细胞Ly6Chigh表达量增加，BrdU表达量无明显变化等。实验结果表明，PRV感染小鼠后，病毒可从感染部位进入中枢神经系统，并造成脑部病变，引起脑部小胶质细胞的增殖活化。通过BrdU示踪技术分析，小胶质细胞的增殖并非原位增殖，而是源于骨髓前体单核细胞分化。本研究建立的小鼠PRV感染模型为进一步研究伪狂犬病毒感染后的天然免疫机制奠定了基础。