一种利用多肽抗原制备同时检测猪瘟和蓝耳病毒抗体的胶体金免疫层析方法

摘要

用人工筛选合成的猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)多肽的葡聚糖偶联物作为包被抗原,以多肽-Biotin-链霉亲和素作为胶体金标记物,羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,建立了同时检测猪瘟和猪蓝耳病抗体的胶体金免疫层析方法(GICA).实验结果表明,多肽与葡聚糖和生物素的偶联效率较高,分别是84.65％和91.37％;链霉亲和素跟胶体金结合的最佳pH和最佳标记量分别为8.2μg/mL和30 μg/mL.试纸卡灵敏度试验表明,血清1∶80稀释时仍可以检出,与IDEXX ELISA试剂盒检出结果基本一致,特异性良好,不与伪狂犬、口蹄疫、圆环、细小病毒等抗体的阳性血清发生交叉反应.与IDEXX试剂盒平行检测结果表明CSFV总体符合率为86.36％;PRRSV总体符合率为83.33％.利用偶联多肽制备的试纸卡灵敏度高,特异性好,且能够同时检测两种病毒抗体,适于基层养殖场使用.