表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价

摘要

为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒(Pec-VP2-PolyA)进行酶切,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建重组质粒pENTR-VP2.采用GatewayLR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒pFosC-ccdBK+共同参与基因片段进行互换反应,构建重组粘粒pFosC-VP2.通过将pFosC-VP2与其它4个相互重叠并且覆盖HVT全基因组的粘粒酶切线性化后共同转染CEF细胞,拯救重组病毒rHVT-VP2.将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,利用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达.动物试验结果表明通过一次免疫rHVT-VP2即可诱导针对传染性法氏囊的完全保护力.