双T-DNA多基因共转化植物表达载体的构建与应用

摘要

多基因复合性状是当前转基因植物发展的主要特色,而且在转基因产品安全评价中,要求去除选择标记基因,以避免选择标记基因可能带来的安全性问题.因此,培育多性状无选择标记基因的转基因植物是当前研究的热点问题之一.目前已提出多种去除筛选标记或多基因转化系统,其中同一载体中含有多个T-DNA的共转化策略是能够同时实现去除筛选标记和多基因转化的简单有效的方法,但多克隆位点中有限的酶切位点限制了插入基因的数目.本研究通过同尾酶技术和双T-DNA技术的结合，构建了多基因双T-DNA植物表达系统。此系统包含2个载体:一个为双T-DNA的植物表达载体DT2300,另一个为基因表达盒构建载体2300M。构建的多基因表达系统能够至少表达6个目标基因，而且通过后代筛选，从而建立起了无选择标记的多基因共转化技术体系，为多基因共转化提供了新的有用工具。